湖南省长沙市长郡中学2016届高三生物二轮复习专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离学生版.doc 71.00 KB
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　　专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离
　　一、课题目标
　　本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
　　二、课题重点与难点
　　课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
　　课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
　　三、学习过程
　　A、自主学习
　　（一）、基础知识
　　一、凝胶色谱法
　　1、概念：也称做          ；是根据                  分离蛋白质的有效方法。
　　2、原理：(1)由       构成的凝胶，内部有许多贯穿的的        。⑵当             不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量      的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程       ，移动速度       ，而相对分子质量       的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在         移动，路程       ，移动速度       ，从而使          不同的蛋白质分子得以分离。
　　分配色谱法   相对分子质量的大小    糖类化合物   通道    相对分子质量  较小  较长  较慢   较大   外部   较短   较快   相对分子质量  
　　二、缓冲溶液
　　1、作用：在一定范围内，抵制       的       对溶液pH的影响，维持pH       。
　　2、配制：由       种缓冲剂溶解于         中配制而成，通过调节缓冲剂的       就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
　　外界  酸和碱   基本不变    1-2   水    比例
　　三、电泳
　　1、概念：指         在电场的作用下发生         的过程。
　　2、原理：在一定的       下，       、       等生物大分子的可解离基团会带上      或       ，在         的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷       的电极移动。
　　3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子           的差异及分子本身的      、     的不同，使带电分子产生不同的                 ，从而实现样品中            的分离。
　　4、方法：常用的电泳方法有                 和                。测定蛋白质分子量时通
　　常使用                                 。
　　带电粒子   迁移   PH   多肽   核酸    正电   负电   电场   相反   带电性质  大小  形状   迁移速度   各种分子   琼脂糖凝胶电泳    聚丙烯酰胺凝胶电泳    SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳
　　四、实验操作
　　1、样品处理:  通过            、               、         等操作收集血红蛋白溶液。
　　(1) 红细胞的洗涤：目的是            。分离时采取                  ，直至上清液中
　　没有            ，表明红细胞已洗涤干净。
　　(2) 血红蛋白的释放：在       和       的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
　　(3) 分离血红蛋白溶液：把             离心后，将试管中的液体用          过滤、除去                 ，于            中静置片刻后，分离出下层的                 。
　　2、粗分离：即透析
　　(1)方法：将血红蛋白溶液装入           ，将            放入一定量适宜浓度的                 中，透析           。
　　(2)目的：将                的杂质除去。
　　(3)原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。
　　3、纯化: 通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下：
　　(1) 凝胶色谱柱的制作。
　　(2) 凝胶色谱柱的装填
　　① 材料：本实验使用的是                        。
　　② 方法：凝胶用           充分溶胀后。配成             ，一次性         倒人色谱柱内。不能有          存在；不能发生            流干，露出凝胶颗粒的现象。
　　(3) 样品的加入和洗脱
　　①a、准备：加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的          缓慢下降到与        平齐，关闭出口。
　　b、加样：用         小心地将1mL透析后的样品加到           的顶端，注意不要破坏                。
　　专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离
　　一、课题目标
　　本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
　　二、课题重点与难点
　　课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
　　课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
　　三、学习过程
　　A、自主学习
　　（一）、基础知识
　　一、凝胶色谱法
　　1、概念：也称做          ；是根据                  分离蛋白质的有效方法。
　　2、原理：(1)由       构成的凝胶，内部有许多贯穿的的        。⑵当             不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量      的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程       ，移动速度       ，而相对分子质量       的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在         移动，路程       ，移动速度       ，从而使          不同的蛋白质分子得以分离。
　　二、缓冲溶液
　　1、作用：在一定范围内，抵制       的       对溶液pH的影响，维持pH       。
　　2、配制：由       种缓冲剂溶解于         中配制而成，通过调节缓冲剂的       就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
　　三、电泳
　　1、概念：指         在电场的作用下发生         的过程。
　　2、原理：在一定的       下，       、       等生物大分子的可解离基团会带上     
　　或       ，在         的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷       的电极移动。
　　3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子           的差异及分子本身的      、    
　　的不同，使带电分子产生不同的                 ，从而实现样品中            的分离。
　　4、方法：常用的电泳方法有                 和                。测定蛋白质分子量时通
　　常使用                                 。
　　四、实验操作
　　1、样品处理:  通过            、               、         等操作收集血红蛋白溶液。
　　(1) 红细胞的洗涤：目的是            。分离时采取                  ，直至上清液中
　　没有            ，表明红细胞已洗涤干净。
　　(2) 血红蛋白的释放：在       和       的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
　　(3) 分离血红蛋白溶液：把             离心后，将试管中的液体用          过滤、除去                 ，于            中静置片刻后，分离出下层的                 。
　　2、粗分离：即透析
　　(1)方法：将血红蛋白溶液装入           ，将            放入一定量适宜浓度的     
　　中，透析           。
　　(2)目的：将                的杂质除去。