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　　高三生物选修1  生物化学与分子生物学技术实践苏教版
　　【本讲教育信息】
　　一、教学内容
　　选修1  生物化学与分子生物学技术实践
　　【重点导学】
　　蛋白质的分离与纯化从生物材料中提取某些特定成分分子生物学进展与PCR技术
　　【全面突破】
　　知识点1  蛋白质的分离与纯化
　　1、蛋白质的分离
　　2、蛋白质的纯化方法
　　①透析法
　　蛋白质分子不能通过半透膜（肠衣、玻璃纸、动物膀胱膜等）的特性，可将待纯化的蛋白质溶液装入半透膜制成的透析袋内，再将透析袋放入透析液（缓冲液）中进行透析。
　　②离心沉淀法
　　控制离心速率，使得分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层，从而达到分离出不同蛋白质的目的。
　　③凝胶色谱法
　　又叫分配色谱法。是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体。这些小球体大多数是由多糖类化合物（葡聚糖或琼脂等）构成的。
　　④电泳法：带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。支持物电泳是目前纯化蛋白质的一种较为普遍的方法。支持物可以是滤纸、可以是醋酸纤维薄膜、大分子凝胶等。采用醋酸纤维薄膜作为支持物具有方法简单、快速、分离清晰、灵敏度高、样品用量少、没有吸附、点样后区带界限清晰等优点，广泛应用于科学实验、临床化验和生化产品的分析（血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白等的分离与鉴定）等方面。
　　醋酸纤维薄膜点样的操作流程：
　　几点说明：
　　1）膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液中，浸透后，取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干。
　　2）加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决定。对血清蛋白质的常规电泳分析，每厘米加样线不超过2～3μL，相当于60～80 μg的蛋白质。
　　3）电泳：可在室温下进行。电压为25 V／cm，电流为0. 4～0. 8 mA／cm 。
　　4）染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，血浆蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色。
　　5）脱色与透明：对水溶性染料应用最普遍的脱色剂是5％醋酸水溶液。为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸：无水乙醇=3：7的透明液中。
　　【典型例题】
　　例1、回答有关蛋白质分离和纯化的问题
　　（1）要获得血清蛋白的粗制品，必须将含有柠檬酸钠的血液进行处理，然后将装入透析袋中除去。
　　（2）要获得血红蛋白，应如何破碎红细胞？。
　　（3）下图为血清蛋白通过醋酸纤维薄膜的电泳图谱，你认为含量最多的蛋白质是，含负电荷最多的球蛋白是，相对分子质量最大的球蛋白是。
　　（4）电泳是目前应用最为普遍的蛋白质的方法。
　　解析：本题考查蛋白质分离和纯化的基础知识。
　　答案：（1）离心上清液