约5150字。

　　《DNA片段的扩增——PCR技术》学案
　　[课标要求]
　　1．理解PCR的原理，讨论PCR应用。
　　2．尝试PCR技术的基本操作。
　　[知识梳理]
　　一．背景知识
　　1．细胞内DNA复制步骤：
　　（1）在作用下解开DNA双链
　　(2 ) 在作用下，以DNA单链为模板，合成一段;（两条DNA模板链各需一个RNA引物）
　　(3 ) 以RNA引物为起点，在作用下，以为原料，按照碱基互补配对原则合成两条新链。
　　2．聚合酶链式反应(PCR)概念;                                                     
　　。
　　3．PCR过程与细胞内DNA复制过程区别：
　　（1）引物是人工合成的单链，２０－３０个脱氧核苷酸，而不是RNA。
　　(2)  解旋通过对反应的控制来实现而不依靠。
　　4．PCR过程：
　　(1) 将PCR缓冲液、、一对引物、四种、DNA聚合酶、Mg2+等成分加入到特制的微量离心管中。
　　(2) 高温变性：
　　。
　　(3) 低温复性：
　　。
　　(4) 中温延伸：
　　。
　　二．实践案例
　　1．PCR实验虽然原理复杂，但操作十分简单，因为生物制剂公司已把PCR缓冲液、DNA聚合酶、脱氧核苷酸贮备液等组分配成了PCR试剂盒，实验人员仅需加入模板DNA及引物即可，所以快速、高效、灵活和易于操作是PCR技术的突出优点。
　　2．材料用具略
　　3．活动程序
　　(1) 加入各种试剂，混合，离心10s，放入PCR仪中。
　　(2) 扩增循环，在PCR仪上设置好PCR热循环程序：
　　循环数 高温变性 低温复性 中温延伸
　　第一次 95℃,5min 55℃,1min 72℃,1min
　　30次 95℃,30s 55℃,30s 72℃,1min
　　最后一次 ¬¬   —— —— 72℃,7min
　　注：反应产物在4℃保存
　　4．检测扩增效果
　　（1）稀释样品10倍
　　（2）以H2O作对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计读数调到零。
　　（3）加入到厚度为1cm的比色杯中，测定260nm处的光吸收值
　　（4）DNA浓度（μg/mL）=（A260nm/0.02）×稀释倍数
　　三．探究活动
　　PCR实验虽然操作简单，但实验设备及药品价格较高，可以利用自己准备的简易材料，设计并进行PCR技术的模拟实验操作。
　　四．PCR技术意义
　　PCR能，从而有效地解决了因为样品中DNA含量而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对DNA分子的分析和检测能力，被广泛应用于、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等。
　　五．小知识：
　　1．DNA的两条链是反向平行的，为了明确地表示DNA的方向，通常将DNA的羟基(-OH)末端称为5’端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3’端延伸DNA链。但DNA合成的方向是从子链的5’端向3’端延伸。
　　2．引物是一段RNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为20—30个核苷酸。
　　3．在80ºC—100ºC的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。
　　[复习指导]
　　本节课复习要注重细胞内DNA复制过程和体外DNA片段的扩增——PCR技术的过程，运用DNA复制过程原理相同的方法，明确体外DNA片段的扩增——PCR技术在基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等方面的地位和作用。如何在体外创设细胞内DNA复制的条件是PCR技术的关键，细胞内的各种条件实际上是利用PCR仪来模拟的。PCR仪原理复杂，操作简单。
　　[典例解析]
　　1.PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同，它们是（）
　　①PCR过程需要的引物是人工合成的DNA单链
　　②PCR过程不需要DNA聚合酶
　　③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的
　　④PCR过程中，DNA不需要解旋，直接以双链DNA为模板进行复制
　　A．①②③④B．①②C．①③D．②④
　　[解析] PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比，主要有两点不同。第一，PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸。第二，PCR过程中，DNA解旋不依赖解旋酶，而是通过对反映温度的控制来实现的。
　　[答案] C。