《蛋白质的提取和分离》学案
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《蛋白质的提取和分离》学案
[课标要求]
尝试蛋白质的提取和分离
[知识梳理]
一.背景知识
1.常用的蛋白质分离提纯技术有 和 等。其中 技术最为快捷灵敏,简便易行。
2.电泳现象: 。
3.电泳技术分离蛋白质的原理:
。
4.聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE): 。
二.实践案例——血清蛋白的提取和分离
1.材料用具(略)
2.活动程序
(1)点样: 新配制血清5μL,与 质 量 浓 度 为0.4g/mL的 蔗 糖 溶 液 及 质 量 分 数为 的 指示剂等体积混匀后,用 加样器吸取5μL样品,小心加到电泳样品槽的胶面上。
(2).电泳:打开稳压稳流电泳仪的电源,将电流调节至 mA,待样品进入分离胶后,改为 mA,当溴酚蓝前沿距离硅胶框下缘 时,将电流调回零。关闭电源。
(3).染色:取出凝胶,放入质量分数为 的 中,染色与 同时进行,使染色液没过胶板,染色 。
(4).脱色:用体积分数为 的 浸泡漂洗数次,每隔 更换脱色液,直至底色脱净,背景清晰。
(5).烘干胶板:将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡 然后将凝胶板放在两层透气玻璃纸中间,自然干燥即可获得血清蛋白的电泳谱带。
3.结果分析
(1)分析没有出现电泳谱带的原因
(2)通过辨认电泳谱带可初步判断血清中蛋白质的种类
三.探究活动
1.牛奶中酪蛋白的提取和检测
提取原理:当pH= 时,酪蛋白的溶解度降低,并析出沉淀。用 除去酪蛋白中的脂肪后,即得到纯的酪蛋白。
检测原理:酪蛋白中的酪氨酸,能与 起颜色反应,首先生成白色沉淀,加热后变成 。
2.卵清蛋白的分离
用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离(同上)
四.意义
1.胰岛素的提纯
2.对细胞癌变做出诊断
[复习指导]
本节课复习以聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)为例,以电泳技术分离蛋白质的原理为基础,
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